一、细胞培养条件
细胞名称：人小细胞肺癌细胞DMS114
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：首次建议1:2传代，每两天更换培养液。
备注：使用无菌离心管收集培养基以进行过渡对比培养，若对比效果不佳，建议直接购买环亚集团·AG88的完全培养基。
二、细胞收到后的处理
收到细胞后，请将其培养至良好状态，并加入完全培养液后封好瓶口，以确保细胞在运输过程中的安全。处理前使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃，5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行后续操作。显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议各拍摄40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后凭证，若未提供照片默认状态良好。
在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后请适度松开瓶盖。
三、细胞培养步骤
a、细胞传代：
如果细胞汇合度未超过80%，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：
- 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
- 向培养瓶中添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱内消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大多变圆且脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加入至少5ml完全培养基以终止消化。
- 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后吸出，再将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
- 按1:2的比例分瓶传代（例如，两个T25瓶），向每瓶补充新完全培养基至5-8ml，然后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
b、细胞冻存：
- 当细胞生长覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
- 向培养瓶中加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞状态，一旦细胞缩回变圆立即加入5ml完全培养液以终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
- 弃上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（参见环亚集团·AG88产品编码：C7001），充分混匀后转移至冻存管中。
- 将冻存细胞放入-80℃冰箱保存。如需转入液氮罐，请在-80℃状态下存放至少24小时后再进行转移。
c、细胞复苏：
- 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶后，使用75%酒精擦拭外壁。
- 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
- 弃去上清，将细胞用5ml完全培养基重悬后接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
- 第二天更换新鲜培养基以继续细胞培养。
四、注意事项
在运输过程中，部分细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这属于正常现象。如脱落数量较多，可将培养瓶中所有培养液收回至离心管中，1000 RPM离心5分钟以收集上清作对比培养。沉淀后添加1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），新培养基补充至5-8ml每瓶，再放入37℃、5% CO2细胞培养箱培养。
五、售后条款
1）细胞出现问题可重发的情况：
可重发的情况包括但不限于：运输途中细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等；细胞污染问题需在收到后48小时内提供真实实验结果并确认重发。对于常温送达的细胞，如静置24小时后存活率低，应提供真实清晰的细胞照片以确认重发。对于干冰冻存的细胞，如复苏后出现污染，亦可申请重发。
2）细胞出现问题不予重发的情况：
包括客户造成的细胞污染、操作不当导致的状态不良以及未使用环亚集团·AG88推荐的培养体系等。若因其他处理导致细胞状态不良，不予重发；细胞收到2天内未告知的问题，也不予重发。
津公网安备 12011302120117