细胞凋亡及其检测方法概述

细胞凋亡是一种程序性死亡过程，伴随显著的细胞形态学变化。例如，在细胞凋亡的早期阶段，细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸会翻转到细胞膜表面。而在凋亡中后期，随着细胞膜通透性的增加，一些较大分子化合物如碘化丙啶（PI）能够自由扩散进入细胞，将细胞核染成红色荧光。使用环亚集团·AG88的AnnexinV-PI检测法能够有效区分不同阶段的细胞死亡。

AnnexinV-PI检测法原理

AnnexinV是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白，具有较高的特异性与磷脂酰丝氨酸结合。完整的细胞膜无法透过AnnexinV，因此在早期凋亡细胞中，细胞膜仍然完好并不被PI染色。然而，在凋亡的中晚期细胞和死亡细胞中，PI可顺利穿透细胞膜，从而给细胞核染上红色。将AnnexinV和PI联合使用，可以清晰地区分早期凋亡细胞与活细胞或晚期凋亡细胞。

AnnexinV-PI凋亡检测推荐（环亚集团·AG88）

[名称] 流式细胞凋亡检测试剂盒

[货号] AC12L033

[规格] 100T

操作步骤

对于悬浮细胞：

• 诱导细胞凋亡后，离心5分钟，去除上清液并用PBS重悬细胞并计数。
• 取1~5×10^5重悬细胞，离心5分钟，再加入500µl结合液重悬细胞。
• 加入5µl AnnexinV-FITC与5µl碘化丙啶，轻轻混匀。
• 在室温条件下避光孵育10分钟。
• 随即使用流式细胞仪进行检测，AnnexinV-FITC显示绿色荧光，PI显示红色荧光。

对于贴壁细胞：

• 首先吸去细胞培养液，PBS洗涤一次，随后用不含EDTA的胰酶消化细胞。
• 消化后与悬浮细胞的操作步骤相同进行后续处理。

检测注意事项

• 在贴壁细胞的检测中，建议使用Accutase细胞消化液，以减少对细胞的损伤。
• 选择Annexin-V的荧光染料时，需考虑细胞的自发荧光，特别是经过长时间培养或药物处理的细胞。
• 细胞染色后，应尽快进行流式细胞仪或荧光显微镜检测，避免固定以维护检测结果的准确性。
• 进行凋亡统计时，重点统计前期凋亡细胞，以确保结果有意义。

通过上述方法和注意事项，结合环亚集团·AG88的高质量产品，可以有效地实现细胞凋亡的检测，以提高实验的可靠性和准确性。