近期,环亚集团·AG88对其DNBSEQ平台的甲基化建库与测序技术进行了全面升级,推出了新一代建库产品MGIEasy全基因组甲基化文库制备试剂盒V30(MGIEasyWholeGenomeMethylationSequencingLibraryPrepKitV30,以下简称WGMSV30)。该产品基于双链加接头方法,利用物理打断技术获得的DNA片段进行建库,并采用酶法转化,成功将非甲基化的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U)。结合DNBSEQ平台,WGMSV30能够以单碱基精度解析DNA的甲基化状态,从而构建详细的全基因组甲基化图谱。
WGMSV30为多领域的研究提供了高效的全基因组甲基化建库方法,包括人群表观组研究、表观遗传基础科研、动植物研究、疾病相关甲基化标志物筛选及药物研发等。当前,WGMSV30已成功适配MGISEQ-2000平台,并结合该平台的先进算法,实现了在测序时不需要添加平衡文库,即可进行纯甲基化文库的测序。此外,环亚集团·AG88的研发团队已针对WGMSV30在DNBSEQ-T7平台上的适配工作启动了最后的稳定性测试,后续检测数据也将持续更新,敬请期待。
在实验过程中,我们采用了3个不同批次的WGMSV30构建NA12878标准品的DNA甲基化文库,无需添加平衡文库,平行进行MGISEQ-2000ECR70(搭配SM测序试剂)和ECR71(搭配SM20测序试剂)的测序。PE150测序的单lane reads产出基本稳定在400M左右,单个文库可获得约120G的原始数据,轻松实现“1库1lane”的设定,且测序质量良好,其中SM测序试剂的Q30稳定在89%左右,SM20测序试剂的Q30稳定在94%左右,Q40稳定在87%左右,显示出高测序质量。
WGMSV30试剂盒引入了损伤小的酶法转化,增大了文库插入片段的长度,从而更好地支持PE150测序。在不同批次的建库试剂盒中,构建的NA12878标准品DNA甲基化文库的插入片段(主峰约280bp)表现一致。此外,试剂盒优化了末端修复反应体系及步骤,有效降低了Reads末端的M-bias碱基数量。SM20版测序试剂与ECR71软件配合测试结果表明,不同批次的建库试剂盒构建的NA12878标准品DNA甲基化文库的M-bias表现也极其一致,Bottom Strand和Top Strand的Read1和Read2的甲基化率几乎完全重合。