一、细胞培养条件

细胞名称：MCA-205（小鼠纤维肉瘤细胞）
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640 + 10% FBS
传代方法：首次建议1:2传代，传代后每2天换液。
备注：使用无菌离心管收集培养基以备对比培养，如对比效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理说明

收到细胞后，请在细胞状态良好时，将完全培养液灌满并封好瓶口。为确保运输细胞的最佳状态，收到细胞时应使用75%酒精对细胞瓶消毒，随后放置于超净台进行无菌处理。细胞瓶应置于37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定后再进行处理。显微镜下观察细胞生长状态，并拍照保存不同倍数的图像（推荐40x，100x，200x各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，如未提供照片则默认细胞状态良好。注意在密封培养瓶放入培养箱时，需稍微松开瓶盖。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基进行对比。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：
若细胞未超过80%汇合度，需将培养液收集至离心管，保留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱继续培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，步骤如下：
1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，若大部分细胞已脱落，迅速回到操作台，轻敲几下后加入5ml以上完全培养基以停止消化。
3. 轻轻吹打以使细胞完全脱落，然后将悬液转移至15ml离心管内，1000RPM离心5分钟，弃去上清后加入1-2mL完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5%CO2细胞培养箱培养。

b、细胞冻存：
1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液用PBS清洗细胞。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml，观察细胞变形后，加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，悬液转移至15ml离心管内，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如果需要转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时后再进行转移。

c、细胞复苏：
1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精消毒外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。
4. 次日更换新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

部分细胞如贴壁不牢，在运输过程中容易脱落这是正常现象。请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养；沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心并弃上清，补充1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例分瓶传代，补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1) 以下情况可重发细胞：
1. 细胞在运输途中出现丢失、瓶身破损、培养液泄漏等问题将重发。
2. 若细胞遭到污染，需在收到产品48小时内提交真实实验结果，经核实后重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时或干冰运输的细胞在复苏24小时未存活（需提供清晰的细胞状态照片）将重发。
4. 如干冰运输的细胞在复苏24小时后或常温发货的细胞静置4小时内未开封出现污染将重发。
5. 若存在细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法确认细胞活力，核实后重发。
6. 收到细胞后，特别是在第1、2、3天拍照，未提供照片视为产品合格。在4-7天内如出现问题，需提供前三天照片及操作记录，经技术人员判定后如确认责任在我方将重发。若双方都有责任，则按合同价的50%进行重发费用的协商处理。

2) 以下情况不予重发：
1. 客户造成的细胞污染不予重发。
2. 不当操作导致细胞状态不佳不予重发。
3. 使用非推荐培养体系导致细胞状态不佳不予重发。
4. 若细胞状态不佳且未提供前三天照片则不予重发。
5. 存在其他处理过程的细胞将不予重发。
6. 收到细胞2天内未告知情况将不予重发。
7. 具体情况视情况而定。

选择细胞培养的正确方法，确保了实验的可靠性及结果的准确性，环亚集团·AG88致力于为科研提供优质细胞资源与服务。